DNA聚合酶用于DNA复制，连接两条DNA单链行成一条DNA双链，作用于碱基对间的氢键。DNA连接酶用于基因工程，将目的基因连在载体（一般为质粒）上，作用于两脱氧核糖核苷酸间的磷酸二脂键。

DNA聚合酶，又称DNA依赖的DNA聚合酶，它是以亲代DNA为模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一类酶。DNA连接酶分为两大类：一类是利用ATP的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA连接酶，另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD*的DNA连接酶。